Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
1. ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ
(i) Подтверждение заявленной чувствительности лизата
Перед использованием лизата в испытаниях указанную на этикетке чувствительность Л, выраженную в МЕ/мл, следует подтвердить в четырех повторностях. Подтверждение чувствительности лизата выполняют при использовании новой партии лизата или при любом изменении экспериментальных условий, способном повлиять на результат испытания.
Готовят стандартные растворы не менее, чем четырех концентраций, эквивалентных 2Л, Л, 0,5Л и 0,25 Л, путем разбавления исходного стандартного раствора эндотоксина водой для ИБЭ.
В каждой из пробирок смешивают раствор лизата с равным объемом одного из стандартных растворов (например, по 0,1 мл каждого). Если используются одноразовые флаконы или ампулы с лиофилизированным лизатом, растворы добавляют непосредственно в ампулу или флакон. Реакционную смесь инкубируют в течение определенного периода, в соответствии с рекомендациями производителя лизата (обычно 37±10С в течение 60±2 минут), избегая вибрации. Исследуют целостность геля: при использовании пробирок каждую из них по очереди извлекают из инкубатора и переворачивают одним плавным движением приблизительно на 1800 Если образуется твердый гель, остающийся на своем месте после пе-
реворачивании, результат записывают как положительный. Результат отрицательный, если неповрежденного геля не образуется.
Результаты испытания считают достоверными, если низшая концентрация стандартных растворов во всех повторностях дает отрицательный результат.
За конечную точку принимают последний положительный результат в нисходящем ряду концентраций эндотоксина. Вычисляют среднее значение логарифмов концентраций в конечных точках и, затем, антилогарифм этого среднего значения по следующей формуле:
Среднее геометрическое концентраций в конечных точках =
antilog [(Se)/f],
где:
Se - сумма логарифмов концентраций в конечных точках в используемом
ряду разведений,
f - число повторностей.
Среднее геометрическое концентраций в конечных точках представляет собой измеренную чувствительность раствора лизата (МЕ/мл). Если это значение составляет не менее 0,5Л и не более 2Л, чувствительность, указанную на этикетке, считают подтвержденной и используют в испытаниях, выполняемых с этим лизатом.
(ii) Определение мешающих факторов
Готовят растворы A, B, C и D в соответствии с Таблицей 2.6.14.-1 и используют не содержащий определяемых эндотоксинов испытуемый раствор в разведении, меньшем МДР в соответствии с указаниями подраздела «1. Предварительные испытания. (i) Подтверждение заявленной чувствительности лизата».
Таблица 2.6.14.-1
Рас Концентрация эндо Раство Фактор Исходная Число
твор токсина/ Раствор, к ритель разведе концентра повтор
которому добавляют ния ция эндо ностей
эндотоксин токсина
А 0 / Испытуемый рас - - - 4
твор
В 2Л / Испытуемый рас- Испы 1 2Л 4
твор туемый 2 1Л 4
раствор
4 0,5Л 4
8 0,25Л 4
С 2Л / Вода для ИБЭ Вода для 1 2Л 4
ИБЭ 2 1Л 4
4 0,5Л 4
8 0,25Л 4
D 0 / Вода для ИБЭ - - - 4
Раствор А - раствор испытуемого препарата, не содержащий эндотоксинов в оп-
ределяемых концентрациях,
Раствор В - тест на мешающие факторы,
Раствор С - контроль чувствительности, указанной на этикетке,
Раствор D - отрицательный контроль (вода для ИБЭ)
Среднее геометрическое концентраций в конечных точках для растворов В и С вычисляют по формуле, приведенной в подразделе «1. Предварительные испытания. (i) Подтверждение заявленной чувствительности лизата».
Испытание на мешающие факторы повторяют в случае любых изменений экспериментальных условий, которые могут повлиять на результат.
Результаты испытания считают достоверными, если растворы А и D во всех повторностях дают отрицательный результат, а результат, полученный для раствора С, подтверждает чувствительность лизата, указанную на этикетке.
Если чувствительность лизата, определенная для раствора В, не менее
